IPTG سیگما (I6758) – القاگر بیان ژن اپران لک و کلونینگ
ماده القاکننده IPTG (Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside) یک آنالوگ مصنوعی از ایزوپروپیل-بتا-دی-گالاکتوپیرانوزید است که به طور گسترده در بیولوژی مولکولی به عنوان القاگر بیان ژن در سیستم اپران لک (Lac Operon) در باکتری اشریشیا کلی (E. coli) مورد استفاده قرار میگیرد. IPTG با اتصال به پروتئین سرکوبگر (Lac Repressor)، ساختار آن را تغییر داده و باعث جدا شدن آن از اپراتور میشود، در نتیجه رونویسی ژنهای ساختاری اپران لک آغاز میگردد. این ماده در فرآیندهای مهندسی ژنتیک، کلونینگ و همچنین در آزمون غربالگری کلونیهای سفید/آبی (Blue-White Screening) کاربرد فراوانی دارد.
کاربردها
| عنوان | توضیح |
|---|---|
| القاگر بیان ژن | فعالسازی رونویسی ژنهای تحت کنترل اپران لک در باکتریها. |
| مهندسی ژنتیک | کنترل بیان ژنهای نوترکیب در وکتورهای کلونینگ. |
| کلونینگ | ایجاد شرایط مناسب برای بیان پروتئینهای هدف در سیستمهای باکتریایی. |
| غربالگری کلونی سفید/آبی | تمایز کلونیهای باکتریایی حاوی پلاسمید نوترکیب (سفید) از کلونیهای غیرنوترکیب (آبی). |
| مطالعات بیان پروتئین | تنظیم سطح بیان پروتئینهای نوترکیب برای مطالعات عملکردی. |
ویژگیها و مشخصات
| ویژگی | مقدار |
|---|---|
| نام محصول | ماده القاکننده IPTG |
| نام تجاری | Sigma-Aldrich |
| کد کاتالوگ | I6758 |
| شماره CAS | 367-93-1 |
| شکل ظاهری | پودر سفید |
| وزن مولکولی | 258.33 g/mol |
| حلالیت | محلول در آب |
مزایا
| عنوان | توضیح |
|---|---|
| القاگری مؤثر | فعالسازی قوی اپران لک برای بیان حداکثری ژن. |
| آنالوگ پایدار | پایداری بیشتر نسبت به لاکتوز طبیعی. |
| کاربرد گسترده | مورد استفاده در اکثر پروتکلهای کلونینگ و بیان ژن. |
| غربالگری آسان | فراهم کردن روشی ساده برای شناسایی پلاسمیدهای نوترکیب. |
سوالات متداول
IPTG چگونه باعث بیان ژن میشود؟
IPTG به پروتئین سرکوبگر LacI متصل شده و آن را از اپراتور Lac غیرفعال میکند. این امر به RNA پلیمراز اجازه میدهد تا به پروموتر متصل شده و رونویسی ژنهای ساختاری اپران لک (مانند lacZ) را آغاز کند.
آیا IPTG توسط باکتری متابولیزه میشود؟
خیر، IPTG توسط باکتریها متابولیزه نمیشود، که این امر باعث میشود غلظت آن در محیط کشت پایدار بماند و بیان ژن به طور مداوم القا شود.
غلظت معمول IPTG مورد نیاز برای القای بیان چقدر است؟
غلظت معمول IPTG مورد استفاده در محیط کشت باکتریها بین ۰.۱ تا ۱ میلیمولار است، اما غلظت بهینه ممکن است بسته به سویه باکتری، وکتور و ژن هدف متفاوت باشد.
نقد و بررسیها
هنوز بررسیای ثبت نشده است.