X-Gal سیگما (B4252) – سوبسترای بتا-گالاکتوزیداز، کلونینگ
سوبسترای کروموژنیک ایکس-گال (X-Gal) که با نام 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopyranoside شناخته میشود، یک معرف شیمیایی است که به طور گسترده در بیولوژی مولکولی برای تشخیص فعالیت آنزیم بتا-گالاکتوزیداز (β-galactosidase) استفاده میشود. این آنزیم معمولاً در باکتری E. coli و در سیستم بیان ژن اپران لک (Lac Operon) وجود دارد. هنگامی که X-Gal توسط بتا-گالاکتوزیداز هیدرولیز میشود، یک محصول آبی رنگ نامحلول (5,5′-Dibromo-indigo) تولید میکند. این ویژگی، X-Gal را به ابزاری کلیدی در آزمون “غربالگری کلونی سفید/آبی” (Blue-White Screening) برای شناسایی کلونیهای باکتریایی نوترکیب که حاوی پلاسمید با اپران لک فعال هستند، تبدیل کرده است.
کاربردها
| عنوان | توضیح |
|---|---|
| تشخیص فعالیت بتا-گالاکتوزیداز | تولید رنگ آبی در حضور آنزیم. |
| غربالگری کلونی سفید/آبی | شناسایی پلاسمیدهای نوترکیب در باکتریها. |
| بیولوژی مولکولی | تأیید موفقیت کلونینگ و بیان ژن. |
| کلونینگ | انتخاب کلونیهای حاوی پلاسمید نوترکیب. |
| بررسی اپران لک | مطالعه عملکرد و تنظیم اپران لک. |
ویژگیها و مشخصات
| ویژگی | مقدار |
|---|---|
| نام محصول | سوبسترای کروموژنیک ایکس-گال / X-Gal |
| نام تجاری | Sigma-Aldrich |
| کد کاتالوگ | B4252 |
| شماره CAS | 7240-90-6 |
| شکل ظاهری | پودر سفید تا سفید مایل به زرد |
| وزن مولکولی | 408.58 g/mol |
| حلالیت | محلول در DMF و DMSO، نامحلول در آب |
مزایا
| عنوان | توضیح |
|---|---|
| تشخیص بصری آسان | تولید رنگ آبی مشخص برای شناسایی آسان کلونیها. |
| کاربرد استاندارد | یکی از روشهای رایج و مورد اعتماد در کلونینگ. |
| حساسیت مناسب | قابلیت تشخیص فعالیت آنزیمی حتی در سطوح پایین. |
سوالات متداول
چگونه X-Gal در آزمون Blue-White Screening کار میکند؟
در این آزمون، پلاسمیدهای کلونینگ دارای بخشی از ژن lacZ هستند. اگر قطعه DNA خارجی وارد شود، lacZ ناقص شده و آنزیم بتا-گالاکتوزیداز تولید نمیشود؛ در نتیجه کلونی سفید باقی میماند. در صورت عدم وجود DNA خارجی، lacZ کامل شده و با هیدرولیز X-Gal، کلونی آبی رنگ میشود.
چرا X-Gal در آب حل نمیشود؟
X-Gal یک مولکول آلی نسبتاً بزرگ و غیرقطبی است که به خوبی در حلالهای آلی مانند دیمتیل فرمامید (DMF) یا دیمتیل سولفوکسید (DMSO) حل میشود، اما حلالیت کمی در آب دارد. به همین دلیل، معمولاً محلول آن در DMF یا DMSO تهیه و سپس به محیط کشت یا آگار اضافه میشود.
چه غلظتی از X-Gal معمولاً استفاده میشود؟
غلظت معمول X-Gal برای افزودن به محیط کشت یا آگار، بین ۲۰ تا ۴۰ میلیگرم در میلیلیتر (mg/mL) است. این محلول معمولاً با DMF یا DMSO تهیه و در دمای اتاق یا ۴ درجه سانتیگراد نگهداری میشود.
نقد و بررسیها
هنوز بررسیای ثبت نشده است.