آنزیم پروتئیناز K پودری سیگما کد P2308 اصل | Proteinase K Sigma
آنزیم پروتئیناز K سیگما (Proteinase K) یک اندوپپتیداز سرینی پایدار و قدرتمند است که از قارچ Tritirachium album استخراج میشود. وجه نامگذاری این آنزیم به دلیل توانایی بینظیر آن در هضم کراتین بومی مو است. پروتئیناز K پیوندهای پپتیدی مجاور اسیدهای آمینه هیدروفوبیک، آلیفاتیک و آروماتیک را شکسته و پروتئینها را به قطعات بسیار ریز هیدرولیز میکند. این آنزیم ابزاری ضروری در پروتکلهای استخراج و خالصسازی DNA و RNA است، زیرا به سرعت و به طور غیرقابل برگشت آنزیمهای تجزیهکننده اسید نوکلئیک مانند RNaseها و DNaseها را در حضور دترجنتهای قوی دناتورهکننده نظیر SDS و اوره غیرفعال میسازد.
کاربردها
| عنوان کاربرد | توضیح |
|---|---|
| استخراج DNA و ژنومیک | حذف کامل پروتئینهای هیستونی و سایر ناخالصیهای پروتئینی در بافت و خون |
| غیرفعالسازی سریع RNaseها و DNaseها | محافظت از ساختار اسیدهای نوکلئیک در برابر تخریب آنزیمی حین لیز سلولی |
| تخلیص RNA باکیفیت و ترانسکریپتومیک | هضم نوکلئازهای سلولی و پایداری مولکولهای RNA در شرایط استخراج ایزوپروپانول |
| اصلاح نفوذپذیری بافتی در In Situ Hybridization | حذف پروتئینهای مسدودکننده برای دسترسی آسانتر پروبهای ژنی به توالیها |
ویژگیها و مشخصات
| ویژگی | مقدار |
|---|---|
| نام آنزیم | Proteinase K from Tritirachium album |
| کد کاتالوگ سیگما | P2308 |
| شماره CAS | 39450-01-6 |
| شکل فیزیکی | پودر لیوفیلیزه سفید رنگ |
| فعالیت ویژه آنزیمی | بیش از 30 واحد بر میلیگرم پودر |
| محدوده دمایی بهینه | 50 تا 65 درجه سانتیگراد |
| دمای نگهداری پودر | 20- درجه سانتیگراد |
مزایا
| عنوان مزیت | توضیح |
|---|---|
| پایداری در حضور دترجنتها | حفظ فعالیت کامل کاتالیزوری در حضور 1% SDS، تریتون X-100 و چلاتورها مانند EDTA |
| محدوده pH فعالیت وسیع | عملکرد هیدرولیتیک پایدار در محدوده pH گسترده بین 4.0 تا 12.0 |
| عاری بودن از آلودگیهای نوکلئازی | عدم وجود هرگونه فعالیت باقیمانده DNase و RNase در پودر تخلیصشده سیگما |
| افزایش سرعت هضم در دمای بالا | بیشترین بازدهی عملکردی در دمای ۵۵ تا ۶۰ درجه سانتیگراد جهت دناتوره شدن بافت |
سوالات متداول
چگونه میتوان فعالیت آنزیم پروتئیناز K را به طور کامل مهار کرد؟
این آنزیم در برابر حرارت بسیار مقاوم است، اما با انکوباسیون در دمای ۹۵ درجه سانتیگراد به مدت ۱۰ دقیقه یا با استفاده از مهارکنندههایی نظیر PMSF غیرفعال میشود.
آیا حضور EDTA باعث غیرفعال شدن پروتئیناز K میشود؟
خیر، اگرچه یون کلسیم ساختار آنزیم را پایدار میسازد، اما حذف آن با EDTA فعالیت کاتالیزوری را مختل نمیکند و همچنان پروتئینها را با قدرت تجزیه مینماید.
شرایط ایدهآل نگهداری استوک محلول پروتئیناز K چیست؟
پودر حلشده در آب مقطر استریل یا بافر تریس-کلسیم با گلیسرول ۵۰ درصد باید در ویالهای تکبار مصرف در دمای ۲۰- نگهداری شود.
نقد و بررسیها
هنوز بررسیای ثبت نشده است.