پروب MitoSOX Red سیگما آلدریچ | سنجش سوپراکسید میتوکندری
معرف MitoSOX Red یک کاوشگر فلورسنت تخصصی، پیشرفته و زنده-سلولی برای شناسایی و سنجش اختصاصی یون‌های سوپراکسید در میتوکندری است. این ماده حاصل اتصال شیمیایی هیدرواتیدیوم به یک گروه کاتیونی تری‌فنیل‌فسفونیوم (TPP+) است که بار مثبت آن موجب تجمع سریع و هدفمند این مولکول در ماتریکس میتوکندری با پتانسیل غشایی منفی می‌شود.
پس از ورود به ماتریکس میتوکندری، MitoSOX به طور انتخابی توسط رادیکال‌های آنیون سوپراکسید (O2•−) اکسید شده و محصول فلورسنت ۲-هیدروکسی‌اتیدیوم ایجاد می‌کند که با اتصال به DNA، فلورسانس قرمز درخشانی ساطع می‌نماید. محصول اصل سیگما آلدریچ استانداردی بدون جایگزین برای مطالعات استرس اکسیداتیو، بیوژننزیس میتوکندری و غربالگری داروهای آنتی‌اکسیدانی است.
کاربردهای تخصصی پروب MitoSOX Red
| تکنیک آزمایشی | فرآیند مورد ارزیابی | پاسخ فلورسانس |
|---|---|---|
| میکروسکوپی فلورسنت و Confocal | تصویربرداری زنده تولید ROS میتوکندری | نشر فلورسانس قرمز درخشان در طول موج ۵۸۰ تا ۶۰۰ نانومتر در اندامک میتوکندری |
| فلوسایتومتری (FACS) | سنجش کمی سطح سوپراکسید در جمعیت سلولی | اندازه‌گیری میانگین شدت فلورسانس (MFI) در کانال PE یا PE-Texas Red |
| پژوهش‌های نورودژنراسیون | بررسی پاتولوژی میتوکندری در پارکینسون | سنجش اختلال تنفسی کمپلکس یک زنجیره تنفسی و انباشت سوپراکسید |
مشخصات فیزیکی و طیف‌سنجی نوری
| پارامتر فنی | مشخصه و ویژگی |
|---|---|
| تولیدکننده رسمی | سیگما آلدریچ (Sigma-Aldrich) |
| شکل ظاهری | جامد پودری یا فیلم قرمز/بنفش تیره |
| طول موج برانگیختگی (Excitation) | ۵۱۰ نانومتر (برانگیختگی توسط سوپراکسید در حدود ۳۹۶ تا ۵۱۰ نانومتر) |
| طول موج نشر (Emission) | ۵۸۰ نانومتر |
| حلال مناسب آماده‌سازی | دی‌متیل سولفوکسید (DMSO) فاقد آب و رطوبت |
| شرایط نگهداری | دمای منفی ۲۰ درجه سانتی‌گراد، تاریکی مطلق و اتمسفر گاز نیتروژن |
مزایای استفاده از پروب MitoSOX Red سیگما
| مزیت اختصاصی | اهمیت در داده‌های آزمایشگاهی |
|---|---|
| هدف‌گیری دقیق میتوکندری | تجمع اختصاصی در اندامک به دلیل بار مثبت TPP+ بدون رنگ‌آمیزی متفرقه سیتوزول |
| گزینش‌پذیری برای سوپراکسید | پاسخ اختصاصی به سوپراکسید بدون تداخل ناشی از سایر ROSها نظیر هیدروژن پراکسید |
| سازگاری کامل با سلول زنده | عدم ایجاد سمیت سلولی در زمان انکوباسیون استاندارد ۱۰ تا ۳۰ دقیقه‌ای |
پرسش‌های متداول پیرامون MitoSOX Red
غلظت کاری و مدت زمان انکوباسیون چقدر است؟
غلظت کاری رایج بین ۱ تا ۵ میکرومولار و زمان انکوباسیون معمولاً ۱۰ تا ۳۰ دقیقه در انکوباتور ۳۷ درجه سانتی‌گراد پیش از تصویربرداری یا آنالیز است.
آیا شستشوی سلول‌ها پس از رنگ‌آمیزی لازم است؟
بله، برای کاهش فلورسانس پس‌زمینه و حذف پروب‌های اتصال‌نیافته، توصیه می‌شود سلول‌ها یک یا دو بار با بافر HBSS گرم شستشو داده شوند.
چگونه از اکسیداسیون خودبه‌خودی پروب جلوگیری شود؟
ویال‌های بازنشده را در تاریکی مطلق نگهداری کنید و استوک‌های حل‌شده در DMSO را در مقادیر بسیار کم الیکوت نموده تا از تماس‌های مکرر با هوا جلوگیری شود.
نقد و بررسی‌ها
هنوز بررسی‌ای ثبت نشده است.