باپتا-ای‌ام سیگما کد A1076 | شلاتور BAPTA-AM اصل
ماده BAPTA-AM با کد محصول A1076 از کمپانی سیگما-آلدریچ، یک شلاتور انتخابی، نفوذپذیر به غشای سلولی و سریع‌العمل برای یون‌های کلسیم ($Ca^{2+}$) است. این مولکول به فرم استوکسی متیل استر (AM) طراحی شده که به دلیل خنثی بودن بار الکتریکی به سادگی از غشای لیپیدی سلول عبور می‌کند. پس از ورود به سیتوزول، استرازهای غیراختصاصی درون‌سلولی گروه‌های استری را هیدرولیز کرده و مولکول باردار BAPTA را آزاد می‌سازند که در سیتوپلاسم محبوس می‌شود. BAPTA با سرعت اتصال (on-rate) فوق‌العاده بالا کلسیم آزاد را به دام انداخته و هرگونه نوسان و افزایش ناگهانی کلسیم سیتوزولی را مسدود می‌نماید.
کاربردها
| عنوان کاربرد | توضیح |
|---|---|
| مهار اختصاصی افزایش کلسیم درون‌سلولی | خنثی‌سازی نوسانات کلسیم ناشی از فعال‌سازی گیرنده‌های جفت‌شده با G-پروتئین و کانال‌های یونی |
| بررسی نقش کلسیم در پدیده آپوپتوز و سمیت | ارزیابی وابستگی مسیرهای مرگ سلولی یا بقای سلولی به تخلیه مخازن کلسیم |
| مطالعات الکتروفیزیولوژی و پچ‌کلمپ | بافر کردن غلظت کلسیم سیتوزولی در مطالعات سینتیک کانال‌های یونی حساس به کلسیم |
| تحقیقات انقباض عضلانی و انتقال پیام عصبی | مهار اگزوسیتوز وزیکول‌های سیناپسی و مهار انقباض عضله وابسته به کلسیم آزاد |
ویژگی‌ها و مشخصات
| ویژگی | مقدار |
|---|---|
| نام محصول | BAPTA-AM |
| برند سازنده | سیگما-آلدریچ (Sigma-Aldrich) |
| کد کاتالوگ | A1076 |
| شماره ثبت CAS | 126150-97-8 |
| فرمول مولکولی | C34H40N2O18 |
| وزن مولکولی | 764.68 g/mol |
| ثابت تفکیک ($K_d$) برای کلسیم | حدود ۱۶۰ نانومولار (پس از هیدرولیز استر) |
| خلوص (Assay) | حداقل ۹۵ درصد (HPLC / NMR) |
| شکل ظاهری | پودر سفید مایل به زرد کم‌رنگ |
| شرایط نگهداری | دمای ۲۰- درجه سانتی‌گراد، محیط کاملاً خشک، دور از نور و رطوبت |
مزایا
| عنوان مزیت | توضیح |
|---|---|
| سرعت اتصال (On-rate) بسیار بالاتر از EGTA | شلاته‌سازی کلسیم با سرعتی حدود ۱۰۰ برابر سریع‌تر از EGTA و به دام انداختن ریزدامنه‌های موضعی کلسیم |
| نفوذپذیری بالا به سلول زنده بدون تخریب غشا | بارگیری درون‌سلولی غیرتهاجمی با استفاده از فرم استری AM بدون نیاز به الکتروپوریشن |
| انتخابی بودن کامل نسبت به یون‌های منیزیم | عدم اتصال به یون‌های $Mg^{2+}$ در غلظت‌های فیزیولوژیک و حفظ عملکرد آنزیم‌های وابسته به منیزیم |
| کیفیت تضمین‌شده در سنجش‌های دقیق بیوشیمی | ارائه نتایج تکرارپذیر در خاموش‌سازی سیگنال‌های وابسته به کلسیم در رده‌های سلولی مختلف |
سوالات متداول
روش بارگیری BAPTA-AM در سلول‌ها به چه صورت است؟
سلول‌ها معمولاً با غلظت ۵ تا ۲۰ میکرومولار BAPTA-AM در بافر یا محیط بدون سرم به مدت ۳۰ تا ۴۵ دقیقه در دمای ۳۷ درجه سانتی‌گراد انکوبه می‌شوند؛ سپس محیط تعویض شده تا استرهای هیدرولیزنشده خارجی حذف گردند.
استوک BAPTA-AM را چگونه باید نگهداری کرد؟
استوک در DMSO خشک و بدون آب با غلظت ۱۰ تا ۲۵ میلی‌مولار تهیه شده، به حجم‌های کوچک تقسیم و در دمای ۲۰- درجه در مجاورت ماده جاذب رطوبت نگهداری شود. فرم استری در مجاورت رطوبت هیدرولیز می‌گردد.
تفاوت BAPTA با EGTA چیست؟
هر دو کلسیم را متصل می‌کنند، اما BAPTA سرعت اتصال بسیار بالاتری دارد و اتصال آن بر خلاف EGTA وابستگی شدیدی به تغییرات کوچک pH ندارد.
نقد و بررسی‌ها
هنوز بررسی‌ای ثبت نشده است.