DAPI سیگما کد D9542 | رنگ فلورسنت DNA هسته اصل
ماده DAPI با نام شیمیایی 4′,6-Diamidino-2-phenylindole dihydrochloride و کد محصول D9542 از برند سیگما-آلدریچ، پرکاربردترین رنگ فلورسنت آبی برای رنگ‌آمیزی اختصاصی هسته سلول و اسیدهای نوکلئیک است. این رنگ به‌طور ویژه به شیار کوچک نواحی غنی از آدنین و تیمین (A-T) در مولکول DNA دو رشته‌ای متصل می‌شود. به دلیل جذب نوری در طول‌موج حدود ۳۵۸ نانومتر و نشر فلورسانس آبی شدید در ۴۶۱ نانومتر، DAPI گزینه‌ای بی‌نقص برای تصویربرداری میکروسکوپ فلورسانس، ایمونوفلورسانس، فلوسایتومتری و تعیین پلاسمیدهای سلولی محسوب می‌شود. قابلیت نفوذ از غشای سلول‌های تثبیت‌شده و اتصال اختصاصی به DNA، حداقل فلورسانس زمینه را به همراه دارد.
کاربردها
| عنوان کاربرد | توضیح |
|---|---|
| رنگ‌آمیزی اختصاصی هسته (Counterstaining) | کنتراست‌دهی هسته سلول‌ها در مطالعات ایمونوسیتوشیمی (ICC) و ایمونوهیستوشیمی (IHC) |
| فلوسایتومتری و تحلیل چرخه سلولی | اندازه‌گیری کمی محتوای DNA هسته‌ای جهت تعیین مراحل چرخه سلولی و بررسی میزان پلوئیدی |
| شناسایی آلودگی مایکوپلاسما | تشخیص سریع آلودگی کشت‌های سلولی به میکروارگانیسم‌های مایکوپلاسما با مشاهده DNA سیتوپلاسمی |
| میکروسکوپی کانفوکال و فلورسانس | تصویربرداری چندکاناله همراه با رنگ‌های فلورسنت سبز (FITC/GFP) و قرمز (Texas Red/RFP) |
ویژگی‌ها و مشخصات
| ویژگی | مقدار |
|---|---|
| نام محصول | DAPI dihydrochloride |
| برند سازنده | سیگما-آلدریچ (Sigma-Aldrich) |
| کد کاتالوگ | D9542 |
| شماره ثبت CAS | 28718-90-3 |
| فرمول مولکولی | C16H15N5 · 2HCl |
| وزن مولکولی | 350.25 g/mol |
| طول موج تهییج و نشر (Excitation/Emission) | تحریک در ۳۵۸ نانومتر / نشر در ۴۶۱ نانومتر (در کمپلکس با DNA) |
| خلوص (Assay) | حداقل ۹۸ درصد (Fluorescence/HPLC) |
| حلالیت | محلول در آب مقطر دیونیزه تا غلظت حدود ۲۰ میلی‌گرم در میلی‌لیتر |
| شرایط نگهداری | دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد یا ۲۰- درجه، محافظت اکید در برابر نور |
مزایا
| عنوان مزیت | توضیح |
|---|---|
| درخشش و سیگنال فلورسانس فوق‌العاده قوی | افزایش بیش از ۲۰ برابری شدت نشر نور فلورسانس پس از اتصال به DNA |
| جداسازی طیفی عالی با فلوروکروم‌های رایج | عدم هم‌پوشانی طیف نشری آبی با رنگ‌های سبز و قرمز در آنالیزهای هم‌زمان |
| پایداری نوری (Photostability) بالا | مقاومت مناسب در برابر محوشدگی نوری (Photobleaching) حین تصویربرداری طولانی |
| کاربری سریع و آسان | پروتکل رنگ‌آمیزی ۵ تا ۱۵ دقیقه‌ای بدون نیاز به مراحل شستشوی پیچیده |
سوالات متداول
تفاوت رنگ‌آمیزی DAPI با Hoechst 33342 در چیست؟
هر دو به شیار A-T در DNA متصل می‌شوند، اما Hoechst 33342 به غشای سلول‌های زنده نفوذپذیری بسیار بالاتری دارد، در حالی که DAPI عمدتاً برای سلول‌های تثبیت‌شده (Fixed) یا سلول‌های با غشای نفوذپذیر استفاده می‌شود.
استوک DAPI چگونه باید آماده و نگهداری شود؟
پودر DAPI را در آب مقطر استریل بدون نوکلئاز با غلظت ۱ تا ۵ میلی‌گرم در میلی‌لیتر حل کرده و در ویال‌های تیره یا فویل‌پیچ در دمای ۲۰- درجه سانتی‌گراد فریز نمایید.
غلظت کاری پیشنهادی DAPI برای تصویربرداری ایمونوفلورسانس چقدر است؟
غلظت کاری متداول بین ۰.۵ تا ۱ میکروگرم در میلی‌لیتر در بافر PBS به مدت ۵ تا ۱۰ دقیقه در دمای اتاق است.
نقد و بررسی‌ها
هنوز بررسی‌ای ثبت نشده است.