مهارکننده E-64 سیگما-آلدریچ | کد کاتالوگ E3132 اصل
مهارکننده E-64 با کد E3132 سیگما-آلدریچ، یک مهارکننده برگشت‌ناپذیر با اختصاصیت فوق‌العاده بالا برای کلاس سیستئین پروتئازها (از جمله پاپائین، کالپائین، کاتپسین B، کاتپسین L و کاتپسین H) است. گروه اپوکسید فعال در ساختار E-64 به طور اختصاصی با گروه تیول (-SH) رزیدوی فعال سیستئین در جایگاه کاتالیتیکی آنزیم واکنش داده و کمپلکس کووالانسی پایداری ایجاد می‌نماید. نکته متمایز این شناساگر عدم مهار پروتئازهای سرینی و متالوپروتئازها و همچنین عدم واکنش‌پذیری با سایر مولکول‌های دارای گروه تیول نظیر گلوتاتیون در غلظت‌های استاندارد است. این ویژگی E-64 را به انتخابی ایده‌آل در پژوهش‌های آپوپتوز، متابولیسم پروتئینی و بافرهای استخراج تبدیل نموده است.
کاربردها
| عنوان کاربرد | توضیح کاربرد |
|---|---|
| تخلیص پروتئین‌های بدون تخریب | مهار برگشت‌ناپذیر سیستئین پروتئازها هنگام لیز بافت‌های پستانداران و باکتری. |
| بررسی مسیرهای مرگ سلولی و کالپائین | مسدودسازی فعال‌سازی سیستم کالپائین وابسته به کلسیم در مدل‌های تخریب سلولی. |
| پژوهش‌های تهاجم توموری و کاتپسین | ارزیابی نقش کاتپسین‌های ترشحی B و L در تخریب ماتریکس خارج سلولی و متاستاز. |
| تیتراسیون جایگاه فعال آنزیم‌ها | سنجش مقدار مولی دقیق آنزیم‌های فعال سیستئینی به روش تیتراسیون استوکیومتری 1:1. |
ویژگی‌ها و مشخصات
| ویژگی | مقدار / مشخصات |
|---|---|
| نام محصول | E-64 protease inhibitor |
| برند سازنده | سیگما-آلدریچ (Sigma-Aldrich) |
| شماره کاتالوگ (Cat No.) | E3132 |
| شماره ثبت CAS | 66701-25-5 |
| فرمول شیمیایی | C15H27N5O5 |
| وزن مولکولی | 357.40 گرم بر مول |
| مکانیسم عملکرد | آلکیلاسیون کووالانسی و برگشت‌ناپذیر رزیدوی سیستئین در جایگاه فعال |
| حلالیت | محلول در آب (تا 20 میلی‌گرم در میلی‌لیتر) و محلول در DMSO و اتانول/آب |
| دمای انبارش | دمای منفی 20 درجه سانتی‌گراد در محیط کاملاً خشک |
مزایا
| عنوان مزیت | توضیح |
|---|---|
| مهار برگشت‌ناپذیر و اختصاصی | اتصال کووالانسی محکم بدون امکان فعال‌سازی مجدد آنزیم پس از رقیق‌سازی بافر. |
| حلالیت استثنایی در آب | انحلال سریع در بافرهای آبی بدون نیاز به حلال‌های آلی که ممکن است پروتئین را دناتوره کنند. |
| عدم تداخل با سایر آنزیم‌ها | هیچ‌گونه اثر منفی مهاری بر سرین پروتئازها، متالوپروتئازها یا فسفاتازها ندارد. |
| سمیت سلولی اندک | امکان استفاده در کشت‌های کوتاه‌مدت بدون ایجاد سمیت‌های عمومی ناشی از ساختار شیمیایی. |
سوالات متداول
غلظت پیشنهادی E-64 در بافرهای لیز چقدر است؟
غلظت کاری معمول آن در بافرهای استخراج بین 1 تا 10 میکرومولار (تقریباً 0.35 تا 3.5 میکروگرم بر میلی‌لیتر) است.
آیا E-64 توانایی عبور از غشای سلول‌های زنده را دارد؟
به دلیل داشتن گروه‌های باردار، E-64 نفوذپذیری پایینی از غشای پلاسمایی دارد. برای مهار درون‌سلولی معمولاً از مشتق متیل استر آن یعنی E-64d استفاده می‌شود.
تفاوت پایداری E-64 در آب در مقایسه با سایر مهارکننده‌ها چیست؟
برخلاف مهارکننده‌هایی نظیر PMSF که در محیط آبی به سرعت هیدرولیز می‌شوند، E-64 در آب خنثی پایداری شیمیایی بسیار بالایی دارد.
نقد و بررسی‌ها
هنوز بررسی‌ای ثبت نشده است.