DTT سیگما کد D0632 اصل | دیتیوتریتول گرید بیولوژی مولکولی
دیتیوتریتول یا DTT سیگما (DL-Dithiothreitol) که به عنوان معرف کللاند (Cleland’s reagent) نیز شهرت دارد، یکی از نیرومندترین عوامل احیاکننده پیوندهای دیسولفیدی در مولکولهای زیستی است. این ترکیب آلی با داشتن دو گروه سولفیدریل (-SH) فعال، از طریق انجام دو مرحله واکنش متوالی تبادل تیول-دیسولفید، حلقهای پایدار با پیوند دیسولفیدی درونمولکولی تشکیل داده و اتصالات دیسولفیدی درون و بین زنجیرههای پروتئینی را به شکل بازگشتناپذیر احیا میکند. DTT نقشی حیاتی در دناتوراسیون کامل پروتئینها پیش از الکتروفورز SDS-PAGE، حفاظت از ساختار و عملکرد فعال آنزیمهای واجد تیول، واکنشهای رونویسی معکوس (RT-PCR) و مهار اکسیداسیون ریشههای سیستئین ایفا مینماید.
کاربردها
| عنوان کاربرد | توضیح |
|---|---|
| آمادهسازی نمونههای SDS-PAGE | شکستن پیوندهای دیسولفیدی پروتئینها در بافر لودینگ جهت حرکت تکزنجیرهای |
| پایدارسازی آنزیمها در واکنشهای سنتز cDNA | محافظت از آنزیم ترانس کریپتاز معکوس و مهارکننده RNase در برابر غیرفعالسازی |
| خالصسازی و ساختارشناسی پروتئینها | ممانعت از تشکیل پیوندهای متقاطع غیراختصاصی و تودهای شدن پروتئینهای نوترکیب |
| سنجشهای بیوشیمیایی حساس به اکسیداسیون | حفظ اتمهای گوگرد فعال در سایتهای فعال آنزیمی در فرم احیا شده آزاد |
ویژگیها و مشخصات
| ویژگی | مقدار |
|---|---|
| نام محصول | DL-Dithiothreitol (DTT) |
| کد کاتالوگ سیگما | D0632 |
| شماره CAS | 3483-12-3 |
| فرمول مولکولی | C4H10O2S2 |
| وزن مولکولی | 154.25 g/mol |
| درجه خلوص | گرید بیولوژی مولکولی (Molecular Biology Grade) |
| شرایط نگهداری | دمای 2 تا 8 درجه سانتیگراد در محیط کاملاً خشک |
مزایا
| عنوان مزیت | توضیح |
|---|---|
| پتانسیل ریدوکس بسیار پایین | احیای موثر و سریع پیوندهای دیسولفیدی در غلظتهای به مراتب کمتر از ۲-مرکاپتواتانول |
| بوی نامطبوع به مراتب کمتر | ایمنی بالاتر و سمیت استنشاقی کمتر نسبت به سایر ترکیبات احیاکننده تیولی مایع |
| تضمین عاری بودن از آنزیمهای تجزیهکننده | فاقد هرگونه فعالیت DNase و RNase جهت اطمینان در پژوهشهای اسید نوکلئیک |
| واکنشپذیری کامل در pH خنثی و فیزیولوژیک | عملکرد کاتالیزوری قوی در محدوده pH بین ۷.۰ تا ۹.۰ بدون نیاز به بازهای قوی |
سوالات متداول
نحوه نگهداری صحیح محلول استوک DTT چگونه است؟
محلولهای آبی DTT به سرعت در مجاورت اکسیژن هوا اکسید میشوند، بنابراین باید به صورت تکبار مصرف آیکوت شده و در دمای ۲۰- نگهداری شوند و از انجماد و ذوب مجدد پرهیز گردد.
تفاوت DTT با ۲-مرکاپتواتانول (BME) در چیست؟
DTT به دلیل تشکیل حلقه پایدار ۶ عضوی، توان احیاکنندگی بسیار بالاتری داشته و در غلظتهای بسیار کمتر (مثلاً ۵۰ تا ۱۰۰ میلیمولار) کارایی بهتری نسبت به BME دارد و بوی زننده کمتری تولید میکند.
آیا در حضور DTT میتوان پروتئینها را با کروماتوگرافی Ni-NTA تخلیص کرد؟
خیر، DTT یونهای نیکل (Ni2+) موجود در رزین نیکل را احیا و ستون را تخریب میکند؛ برای ستونهای تمایلی نیکل باید از احیاکنندههای سازگار نظیر TCEP استفاده شود.
نقد و بررسیها
هنوز بررسیای ثبت نشده است.