IPTG سیگما کد I6758 اصل | القاکننده بیان ژن Isopropyl β-D-thiogalactopyranoside
معرف IPTG سیگما (Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside) یک مولکول شیمیایی صناعی و آنالوگ پایدار لاکتوز است که به عنوان القاکننده استاندارد و قدرتمند در بیان ژنهای تحت کنترل اپران لک (Lac Operon) در باکتری اشریشیا کلی (E. coli) شناخته میشود. IPTG مستقیماً به پروتئین مهارکننده لک (Lac Repressor) متصل شده و با تغییر ساختار فضایی آن، مانع اتصال این پروتئین به اپراتور ژن میگردد که این امر رونویسی ژن هدف را فعال میسازد. از آنجا که باکتری قادر به متابولیزه و هیدرولیز کردن IPTG از طریق آنزیم بتا-گالاکتوزیداز نیست، غلظت این معرف در حین فاز رشد ثابت مانده و بیان پروتئین نوترکیب در بالاترین سطح ممکن و با ثبات فوقالعاده صورت میپذیرد.
کاربردها
| عنوان کاربرد | توضیح |
|---|---|
| القای بیان پروتئینهای نوترکیب | تحریک رونویسی سیستمهای بیانی مبتنی بر پروموتور T7 نظیر پلاسمیدهای سری pET |
| غربالگری سفید/آبی (Blue-White Screening) | تشخیص کلونیهای باکتریایی نوترکیب در حضور سوبسترای کروموژنیک X-Gal |
| مطالعات تنظیم ژنتیکی باکتریها | بررسی رفتار ترانسکریپشن و مهار رونویسی در سیستمهای ژنتیکی آزمایشگاهی |
| تولید صنعتی آنزیمها و پروتئینها | افزایش چشمگیر غلظت پروتئینهای هترولوگ در فرمانتورها و بیوراکتورهای زیستی |
ویژگیها و مشخصات
| ویژگی | مقدار |
|---|---|
| نام محصول | Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside (IPTG) |
| کد کاتالوگ سیگما | I6758 |
| شماره CAS | 367-93-1 |
| فرمول مولکولی | C9H18O5S |
| وزن مولکولی | 238.30 g/mol |
| درجه خلوص با روش دیوکسان-فری | حداقل 99 درصد (خلوص فوقالعاده بالا) |
| دمای نگهداری پودر | 20- درجه سانتیگراد |
مزایا
| عنوان مزیت | توضیح |
|---|---|
| پایداری متابولیکی و ماندگاری اثر | غیرقابل تجزیه توسط سلول باکتری، که امکان حفظ حداکثر القای مداوم را فراهم میکند |
| خلوص عاری از دیوکسان (Dioxane-Free) | حذف کامل حلالهای سمی تداخلی در فرآیندهای حساس بیولوژی مولکولی |
| حلالیت بسیار مطلوب در آب مقطر | آمادهسازی آسان و بدون رسوب استوکهای غلیظ برای فیلتراسیون استریل |
| تکرارپذیری عالی در آزمایشها | دستیابی به بالاترین میزان پروتئین نوترکیب در انکوباسیونهای بهینهشده باکتری |
سوالات متداول
غلظت نهایی مورد استفاده IPTG برای القای بیان ژن چقدر است؟
غلظت نهایی IPTG در محیط کشت باکتری معمولاً در محدوده ۰.۱ تا ۱.۰ میلیمولار (بسته به نوع پروموتور و تمایل به تشکیل اینکلوژن بادی) بهینه میشود.
چرا برای غربالگری کلونیها از ترکیب IPTG و X-Gal استفاده میشود؟
IPTG به عنوان القاکننده بیان ژن بتا-گالاکتوزیداز عمل کرده و X-Gal به عنوان سوبسترای رنگی توسط این آنزیم شکسته میشود تا کلونیهای بدون اینسرت آبی رنگ گردند.
نحوه نگهداری محلول استوک IPTG حل شده چیست؟
محلول استوک ۱۰۰ میلیمولار IPTG در آب مقطر استریل فیلتر شده، باید در مقادیر کم تقسیم گردیده و در دمای ۲۰- درجه سانتیگراد نگهداری شود.
نقد و بررسیها
هنوز بررسیای ثبت نشده است.